| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 818-1 | ||||
Resumo:LPMOs (do inglês, Lytic Polysaccharide Monooxigenases) são metaloenzimas que dependem da presença de um átomo de cobre no seu sítio ativo, o qual precisa ser reduzido por um doador de elétrons para iniciar o processo de catalise. Entre os parceiros redox para LPMOs se encontram diversas moléculas de baixa massa molar (ácido ascórbico, por exemplo), pigmentos foto ativados, lignina ou enzimas como a celobiose deshidrogenase (CDH). Entre as oito famílias de LPMOs, a família 9 (AA9) tem sido uma das mais estudadas, chegando a ter sua aplicação industrial em processos de sacarificação enzimática de biomassa lignocelulósica, fazendo parte dos coquetéis enzimáticos comerciais de última geração. No entanto, ainda existem aspectos enigmáticos dessas enzimas a serem plenamente descritos, como seu mecanismo catalítico, o seu co-substrato natural (O2 ou H2O2) e a função das regiões desordenadas no C-terminal (dCTR), as quais foram recentemente identificadas. As dCTRs são estruturas que aparecem com alta frequência anexadas aos domínios catalíticos de LPMOs, sendo ausentes em outras enzimas ativas em carboidratos. Durante as pesquisas desenvolvidas pelo nosso grupo foi encontrada e caracterizada uma LPMO da família AA9 contendo uma dCTR (AfAA9C). De todos os estudos relacionados às AA9, esta foi o primeiro que manteve a dCTR, deste modo, pretendemos realizar um estudo comparando AfAA9C e a mesma enzima truncada (AfAA9CTR). Neste trabalho AfAA9CTR foi obtida através da remoção da dCTR amplificando a região de interesse pela técnica de PCR a partir do DNA genômico de A. fumigatus, utilizando primers desenhados para inserção no vetor pEXPYR. O fragmento foi inserido no vetor pelo método de Gibson Assembly (GA), e transformados em cepa bacteriana E. coli Turbo. Os plasmídeos recombinantes extraídos foram utilizados para transformar o fungo filamentoso A. nidulans linhagem A773. As proteínas transformadas serão utilizadas para participar de uma análise comparativa com AfAA9C que visa avaliar a influência da dCTR nas características bioquímicas, assim como na produção/resistência a H2O2 e na interação com outras enzimas oxidativas a CDH. Palavras-chave: Cazymes, A. nidulans, LPMO, Domínios sem função Agência de fomento:FAPESP | |||||