| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 637-1 | ||||
Resumo:Atualmente a formação do biofilme polimicrobiano é um dos grandes fatores de risco para várias infecções recorrentes. Inúmeros microrganismos têm apresentado resistência aos fármacos convencionais, sendo um de seus principais motivos a formação de biofilme, uma estrutura complexa que ocorre quando um conjunto de microrganismos se envolve em uma matriz extracelular polimérica. Peptídeos antimicrobianos (AMPs) são moléculas do sistema imunológico de vários organismos e possuem um amplo espectro de atividades. Sendo assim, nosso grupo de pesquisa desenhou dois peptídeos baseados na região γ-core da defensina PvD1, isolada de Phaseolus vulgaris. Desse modo, o objetivo deste trabalho foi analisar in vitro o potencial antibiofilme de peptídeos bioinspirados sobre biofilmes polimicrobianos de isolados clínicos. Inicialmente, os peptídeos γ33-41PvD1++ e γ31-45PvD1++ foram testados em concentrações, que variavam de 300 µM a 37,5 µM, contra isolados clínicos polimicrobianos (154DR8 e 153DR5), com prevalência da levedura Malassezia furfur. Ademais, determinamos a mínima concentração inibitória (MIC), analisamos a viabilidade celular e investigamos o modo de ação desses peptídeos bioinspirados através de ensaios de permeabilização de membranas utilizando a sonda fluorescente sytox green e ensaios de indução endógena de espécies reativas de oxigênio (ROS), usando a sonda diclorofluoresceína diacetato (H2DCFDA). Na pré-formação dos biofilmes observamos que o peptídeo γ33-41PvD1++ apresentou uma inibição de 77,5% e 29,5% na maior concentração utilizada, para os isolados 154DR8 e 153DR5, respectivamente. Já o peptídeo γ31-45PvD1++ foi capaz de inibir 100% da pré-formação dos biofilmes nas concentrações de 300, 150 e 75 µM para ambos os isolados clínicos, sendo a MIC de 75 µM. Adicionalmente, os isolados tratados com 300, 150 e 75 µM do peptídeo γ31-45PvD1++, tiveram 100% de perda de viabilidade celular. Observamos também que tanto o peptídeo γ33-41PvD1++ na concentração de 300 µM, quanto o peptídeo γ31-45PvD1++, na concentração de 37,5 µM, ocasionaram um comprometimento da membrana plasmática e aumentaram a produção endógena de ROS nas células microbianas. Os próximos passos consistem em identificar os microrganismos presentes no biofilme polimicrobiano, observar o biofilme após o tratamento com os peptídeos por microscopia eletrônica de varredura e transmissão, analisar alterações conformacionais por dicroísmo circular dos peptídeos na presença de modelos de membrana e solventes, e realizar testes in vitro para avaliar a toxicidade dos peptídeos em células de mamíferos e in vivo utilizando larvas de Galleria mellonella. Palavras-chave: atividade antibiofilme, biofilmes , peptídeos antimicrobianos, resistência microbiana, resistência a fármacos Agência de fomento:Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro - FAPERJ. | |||||