| Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023 | Resumo: 511-1 | ||||
Resumo:A preservação bacteriana visa manter viáveis, garantindo a manutenção e a sua utilização a qualquer momento. A conservação de bactérias em óleo mineral, onde se aplica uma camada de óleo mineral de 1 a 3 cm³ sobre o meio de cultura estocada a temperaturas de 4°C a 20°C, enquanto que a técnica de congelamento (criopreservação) consiste no armazenamento de bactérias a temperaturas inferiores a -20°C. Ambas as técnicas limitam o seu contato com o oxigênio diminuindo o metabolismo e a taxa de multiplicação. O objetivo deste trabalho foi comparar as técnicas de criopreservação e uso de óleo mineral na conservação de isolados bacterianos. As atividades de pesquisa foram realizadas no Laboratório de Bioquímica e Genética (LABIOGEN) da UFPR-Setor Palotina. Para iniciar os trabalhos foram escolhidos 2 isolados bacterianos da coleção de bactérias isoladas endofíticas, conservadas em meio LG a -80°C. Os isolados UFPREN1e UFPREN 69 foram previamente classificados como gram-negativo/bacilos e gram-negativo/cocos, respectivamente. As colônias puras foram obtidas por repique em fluxo laminar e as placas foram levadas para BOD a 30°C até o crescimento. Concomitantemente ao processo de purificação, foi realizada a coloração de gram e a morfologia das colônias pela visualização em microscópio ótico. O armazenamento em óleo mineral foi avaliado em duas concentrações: 1) 700 µl do meio de cultivo com o isolado em 300 µl de óleo mineral (30%) e, 2) 500 µl do meio de cultivo com o isolado em 500 µl de óleo mineral (50%), ambos tratamentos armazenados em temperatura ambiente. Como controle, foi realizado o armazenamento usando 700 µl do isolado crescido em meio LB com 300 uL de glicerol em microtubos colocados em freezer -80°C (criopreservação). Todos os tratamentos foram realizados em triplicata. Após o período de 30 dias realizou-se novamente o repique dos isolados para avaliar a viabilidade dos isolados após armazenamento, considerando o seu tempo de crescimento, presença de contaminações e classificação em função da coloração de gram e da morfologia. Como resultados obtidos, em relação ao tempo de crescimento, não houve diferenças entre as técnicas avaliadas. Também não foram observadas a presença de contaminação em nenhuma placa. Em relação à morfologia e coloração gram, os isolados mantiveram-se intactos: isolado 1 (gram-negativo e bacilos) e isolado 69 (gram-negativo e cocos). Como conclusão geral, a técnica de armazenamento em óleo mostrou uma nova opção para o armazenamento bacteriano, haja vista a maior facilidade de manuseio e menor custo.
Palavras-chave: Conservação, Bactéria, Óleo mineral, Criopreservação, Armazenamento Agência de fomento:Universidade Federal do Paraná (UFPR) | |||||