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Congresso Brasileiro de Microbiologia 2023
 		Resumo: 165-1

165-1

INFLUÊNCIA DO GENE ppk2b NA FORMAÇÃO DE BIOFILME E INTERAÇÃO COM CÉLULAS HEp-2 EM Corynebacterium diphtheriae

Autores:
Renata Lourenço Lydio (UERJ - Universidade do Estado do Rio de Janeiro) ; Andrezza do Espírito Santo Cucinelli (UERJ - Universidade do Estado do Rio de Janeiro) ; Camila Azevedo Antunes de Oliveira (FAU ERLANGEN-NÜRBERG - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg) ; Louisy Sanches dos Santos Sant’anna (UERJ - Universidade do Estado do Rio de Janeiro) ; Ana Luiza de Mattos Guaraldi (UERJ - Universidade do Estado do Rio de Janeiro) ; Débora Leandro Rama Gomes (IFRJ-CAMPUS REALENGO - Instituto Federal do Rio de Janeiro - Campus Realengo)

Resumo:
A difteria é uma doença bacteriana toxêmica de evolução aguda, que possui como agente etiológico o bacilo Gram-positivo Corynebacterium diphtheriae. O polifosfato (PoliP) possui papel fundamental na virulência e na resistência a estresses ambientais em diversas espécies bacterianas. Já foi demonstrado o envolvimento do gene ppk (responsável pela síntese da polifosfatoquinase - PPK) na formação de biofilme por Pseudomonas aeruginosa: cepas mutantes tiveram sua motilidade e capacidade de formação de biofilme reduzidas. O objetivo deste trabalho foi investigar a influência do gene ppk2b, codificador da enzima PPK2B, na formação de biofilme em diferentes substratos e meios de cultivo e na interação com células epiteliais humanas (HEp-2). Nesse sentido, foi realizada a construção de cepa mutante para o gene alvo e sua respectiva cepa complementar. Como resultados, foi observado que a amostra mutante LDCIC-PPK2B (gene ppk2b interrompido), quando cultivada em caldo TSB, apresentou maior habilidade em formar biofilme em superfície de poliestireno ou vidro que a cepa selvagem CDC E-8392 e a complementar LDCIC-PPK2B/pXMJ19Cm. O cultivo em caldo King B modificou o perfil de aderência ao poliestireno: as cepas selvagem e complementar apresentaram-se moderadamente aderentes, enquanto que a cepa mutante passou a aderir fracamente a este substrato. A interrupção do gene ppk2b também modificou o padrão de aderência e a habilidade em aderir a células HEp-2. A cepa mutante LDCIC-PPK2B exibiu padrão de aderência agregativo (presença de grupos de bactérias com aparência de “tijolos empilhados”), diferente do padrão apresentado pela cepa selvagem (padrão difuso). Além disso, a cepa mutante LDCIC-PPK2B exibiu maior percentual de aderência a células HEp-2 (84,97 ± 3,19 %) que a cepa selvagem CDC E-8392 (60,55 ± 5,8 %) (p < 0,05). Contudo, não houve diferença significativa nos percentuais de invasão celular. Por fim, estudos adicionais são necessários para elucidar o papel da PPK2B na viabilidade celular, susceptibilidade a antimicrobianos e produção de toxina diftérica. Também é importante realizar a mesma investigação para o gene ppk2a, visto que C. diphtheriae produz duas PPK: a PPK2A e a PPK2B.

Palavras-chave:
 biofilme, células HEp-2, Corynebacterium diphtheriae, polifosfato, polifosfatoquinase


Agência de fomento:
CAPES e IFRJ