Resumo

Introdução: Atualmente, Multilocus Sequence Typing (MLST) tem sido considerada a técnica mais eficaz, dinâmica e de globalização na tipagem e epidemiologia molecular de linhagens bacterianas. Considerando a incidência, patogenicidade e disseminação de M. tuberculosis no âmbito mundial, é de extrema importância ampliar e globalizar os estudos moleculares e epidemiológicos desses patógenos. O presente estudo teve como objetivo a padronização da técnica de MLST para M. tuberculosis, visando a criação e disponibilização de um banco de dados para este patógeno. Materiais e Métodos: Foram selecionados 10 genes housekeeping (aroE, ddl, fumC, gyrA, gyrB, katG, purA, recA, rpoB e sodA) a partir do genoma da linhagem M. tuberculosis H37Rv (ATCC 27294) e desenhados primers para amplificar, pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), fragmentos de cada gene selecionado. Foram estudadas 14 linhagens de M. tuberculosis, das quais, 12 são oriundas do município de Araraquara-SP e duas de Dourados-MS. O DNA genômico das linhagens foi extraído e utilizado como molde para amplificação dos fragmentos dos genes housekeeping, os quais foram purificados, seqüenciados e as respectivas seqüências foram analisadas no Programa ChromasPro. Resultados e Discussão: Todos os genes housekeeping foram amplificados com os primers desenhados. Analisando os resultados de seqüenciamento, foi possível observar que os genes que apresentaram melhor desempenho foram: ddl, fumC,gyrA, gyrB, katG, purA e rpoB, sendo estes os 7 genes housekeeping selecionados para tipagem de MLST para M. tuberculosis. As 12 linhagens originárias de Araraquara mostraram-se altamente clonais, sendo que apenas 2 delas apresentaram mutações resultantes em diferentes tipos de seqüência (ST). Já, as duas linhagens originárias da cidade de Dourados, apresentaram dois STs diferentes entre si e também das linhagens de Araraquara, indicando maior diversidade genética. Conclusões: Pela primeira vez está sendo proposta a criação de um banco de dados mundial de MLST para M. tuberculosis. Os genes housekeeping estudados indicam que são eficientes e bons candidatos para tipagem de MLST em linhagens de M. tuberculosis. No entanto, estudos mais detalhados envolvendo linhagens de outros estados brasileiros e até outros países, poderão confirmar estes dados antes da criação e disponibilização do banco de dados. Apoio: CAPES e FAPESP.