Resumo

e Brucelose é o termo utilizado para um grupo de doenças em humanos e animais causadas por bactérias do gênero Brucella (B. abortus, B. melitensis, B. suis, B. canis, B. ovis, B. neotomae, B. microti, B. ceti, B. pinnipedialis e B. inopinata). O perigo na manipulação destes microrganismos, processos laboriosos de tipificação, demora na obtenção de resultados e instabilidade de características fenotípicas ou isolamento de linhagens atípicas, dificultam a tipificação e encorajaram a busca de técnicas moleculares, que além de resolver estas dificuldades, facilitariam a investigação epidemiológica dos casos humanos e animais. Com a finalidade de promover uma ampla comparação entre os genomas, e poder analisar simultaneamente eventos de deleções, inserções, mutações e seqüências repetitivas ou qualquer outro evento de polimorfismo, foi realizado o alinhamento múltiplo das seqüências dos cromossomos I e II das B. abortus, B. melitensis, B. suis, B. canis e B. ovis, disponíveis no GenBank até setembro de 2009. As regiões marcadoras de polimorfismos nas seqüências de DNA, específicas para B. abortus, B. melitensis, B. canis e B. ovis, foram confirmadas por BLASTn, submetidas a BLASTx, para verificação de função conhecida e conservada, e utilizadas no desenho de sete pares de primers com finalidade diagnóstica de diferenciação molecular das espécies, sendo um par de primer desenhado para B. abortus e dois pares para B. canis, B. melitensisB. ovis. Para B. canis e B. ovis, um dos pares de primer desenhado foi dirigido para uma seqüência polimórfica única destas espécies, que gerou apenas um amplicon do tamanho esperado para espécie, enquanto que os demais pares de primers foram ancorados na seqüência conservada de todas as espécies, que flanqueavam deleções nas espécies alvo, gerando dois amplicons que diferenciam a espécie alvo das demais pelo tamanho do fragmento gerado. A especificidade destes foi aferida no Primer Blast e testada nas 18 cepas de referência de Brucella, incluindo as B. abortus, B. melitensis, B. suis e seus biovares, além da B. canis, B. ovis e B. neotomae, 20 isolados de campo de B. abortus e 30 de B. canis. Dos primers testados, todos resultaram na amplificação do fragmento esperado das cepas de referência, e isolados de campo de B. abortus e B. canis. Estes resultados mostram que os marcadores desenhados, são promissores na diferenciação destas espécies e no diagnóstico de infecções em humanos e animais, sendo necessários apenas testes de especificidade em isolados de campo das demais espécies de Brucella spp.