Resumo

INTRODUÇÃO: Diversas regiões gênicas têm sido estudadas para identificação de genes que codificam proteínas específicas de Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Estes estudos têm como objetivo aumentar o desempenho da detecção do fungo por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). A literatura tem relatado a pesquisa de três regiões gênicas, um segmento específico do gene HcP100 de H. capsulatum, um segmento do gene que codifica o antígeno M e outro segmento que codifica o antígeno H. MATERIAIS E MÉTODOS: A fim de determinar a região gênica mais sensível para detecção de H. capsulatum var. capsulatum três protocolos de PCR já descritos na literatura foram avaliados. a) HcP100, que utiliza o par de primers Hc III (5-GAG ATC TAG TCG CGG CCA GGT TCA -3) e Hc IV (5-AGG AGA GAA CTG TAT CGG TGG CTT -3) e amplificam um produto de 210 pb. b) par de primers Msp2F (CGG GCC TTT AAC AGC GCC) e Msp2R (ACC AGC GGC CAT AAG GAC GTC) que amplificam um produto de 279 pb, e tem como alvo o gene que codifica o Antígeno M. c) par de primers Hc2 (5-GCG GGG TTG GCT CTG CTC T-3) e Hc3 (5-TTG GAA ACC CCG GGC TTG -3) que tem como alvo o gene que codifica o antígeno H e amplifica o produto de 439 pb. Com a finalidade de determinar qual o limite mínimo de detecção de cada protocolo todos os primers foram testados com as mesmas concentrações de DNA conforme apresentado a seguir: 25; 0,5; 1x10^-1; 2x10^-3; 4x10^-5; 8x10^-8 ng em volume final de 25 uL e submetido à amplificação conforme descrito na literatura. DISCUSSÃO DOS RESULTADOS: O protocolo que utiliza como alvo o gene que codifica a proteína de 100 kDa e o gene que codifica o Antígeno M foram capazes de detectar concentrações de DNA de 0,01 e 0,5 ng, respectivamente. O protocolo que tem como alvo o Antígeno H apresentou uma banda inespecífica maior que 1000 pb. CONCLUSÃO: O método de amplificação que demonstrou maior capacidade de detecção foi o que teve como alvo o gene que codifica a proteína de 100 kDa.