Resumo

INTRODUÇAO:Os avanços da medicina levaram ao prolongamento da sobrevida de pacientes imunocomprometidos e ao aumento da importância das infecções oportunistas por fungos. As técnicas de laboratório convencionais para identificação de fungos (características de cultura, bioquímicas, fisiológicas e morfológicas) têm um tempo de liberação longo. Ferramentas como o diagnóstico molecular tem se mostrado promissora na detecção do Histoplasma capsulatum var. capsulatum. Diversos protocolos de extração tem sido usados para a obtenção do DNA de fungos, entretanto, dependendo da espécie em estudo e das condições laboratoriais, são necessárias algumas modificações e adaptações nos protocolos para a obtenção de padrões nítidos e reprodutíveis de banda de DNA. MATERIAIS E METODOS: A fim de selecionar a metodologia de extração mais adequada para extração do DNA do H. capsulatum foram testadas três metodologias. a) extração baseada em membranas de sílica b) extração baseada na precipitação por sais c) extração baseada em fracionamento por polaridade usando Fenol-Cloroformio. DISCUSSAO DOS RESULTADOS: As três metodologias de extração avaliadas resultaram em concentrações semelhantes de DNA extraído, uma vez que o parâmetro concentração final de DNA não permitiu definir qual a metodologia de extração mais adequada foram utilizados outros critérios como numero de etapas, pureza do DNA extraído, e tempo necessário para execução do método. O DNA obtido pela metodologia de membrana de sílica apresentou as maiores razoes de pureza, e necessitou de menor tempo para execução das etapas. A metodologia de extração que usa precipitação por sais resultou nas menores razoes de pureza. A metodologia que utiliza extração por fracionamento por polaridade em Fenol-Cloroformio resultou em grandes concentrações de DNA extraído e grau de pureza aceitáveis, entretanto necessitou de maior numero de etapas e maior tempo de execução. CONCLUSAO: O método de extração de DNA de Histoplasma capsulatum que demonstrou as melhores razões de pureza, menor numero de etapas no procedimento e menor tempo de execução foi o que utilizou membrana de sílica. Instituição de fomento: Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado do Amazonas (FAPEAM)