Resumo

Introdução Recentemente, o surgimento e a disseminação de enterobactérias produtoras de carbapenemases em hospitais brasileiros tem representado um grande desafio à prática clínica. O objetivo deste estudo foi caracterizar uma nova variante de beta-lactamase do tipo GES, identificada em um isolado clínico de S. marcescens resistente a carbapenem proveniente do Rio de Janeiro, Brasil. Metodologia Os testes de sensibilidade aos antimicrobianos foram realizados por microdiluição em caldo, segundo as recomendações do CLSI. A pesquisa de carbapenemases no isolado foi feita por PCR e por teste de hidrólise do imipenem. A caracterização do gene bla_GES e de seu contexto genético foi realizada por PCR e sequenciamento. A localização do bla_GES foi estudada por extração plasmidial e transformação em cepa receptora E. coli TOP10. O gene bla_GES-16 foi clonado e expresso em E. coli TOP10. A focalização de ponto isoelétrico foi realizada para determinação do pI desta nova variante de GES. Resultados O isolado clínico de S. marcescens apresentou resistência aos carbapenens, ticarcilina, ceftazidima, gentamicina, ciprofloxacina e ácido nalidíxico; porém, apresentou sensibilidade à cefepima e ao aztreonam. Uma nova variante GES foi identificada e nomeada GES-16. A sequência de aminoácidos presumível da GES-16, comparada à sequência da GES-1, apresenta as substituições G165S, responsável pela atividade carbapenemase, e Q38E. Análise do sequenciamento revelou que bla_GES-16 está inserido em um integron de classe 1 que possui um promotor fraco e um gene codificador da integrase truncado. A região variável do integron é formada pelos seguintes cassetes gênicos: um catB3 truncado, bla_GES-16, dfr22, aac(6')-IIc e aadA1. A obtenção de transformantes confirmou a localização plasmidial do bla_GES-16. A expressão do bla_GES-16 clonado em E. coli TOP10 confirmou a elevação das CIMs dos carbapenems. A focalização isoelétrica demonstrou que o transformante e o clone produziam apenas uma beta-lactamase, correspondendo à GES-16, com pI de 5,6. Conclusão O presente estudo identificou uma nova variante de GES com atividade contra os carbapenens. A crescente diversidade destes determinantes de resistência indica a constante evolução das beta-lactamases em busca de um maior espectro de atividade provavelmente em resposta à pressão seletiva exercida pelo maior uso de carbapenens.