Resumo

A identificação de agentes causadores de fungemia é importante para definir o tratamento clínico, entretanto, a identificação convencional, na maioria dos casos, pode ser morosa e por tempo indeterminado. Diante desta realidade ferramentas capazes de propiciar diagnóstico rápido e identificação precisa quando comparados aos métodos convencionais estão sendo utilizadas. Objetivou-se neste estudo identificar agentes causadores de fungemias provenientes de amostras clínicas utilizando a reação em cadeia da polimerase e análise do polimorfismo dos fragmentos de restrição (PCR/RFLP). Foram utilizadas 30 amostras clínicas isoladas de pacientes atendidos na Fundação de Medicina Tropical do Amazonas no período de Março à Abril de 2010. Estas foram identificadas através da metodologia convencional. A origem clínica destas foram: líquido cefalorraquidiano 18 (60%), lavado brônquico 4 (13,3%), fragmentos de tecido 4 (13,3%), hemocultura 3 (10%) e líquido ascítico 1 (3,3%). A extração foi realizada utilizando o Kit comercial QIAmp DNA Blood and Tissue. A amplificação da região ITS do DNA ribossômico foi realizada com os primers ITS5/NL4, a digestão dos produtos de PCR com a enzima de restrição Ddel. Produtos foram visualizados em gel de agarose à 1,5%. Padrões moleculares para sete das principais fungemias (C. albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. glabrata, Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii e Histoplasma capsulatum) haviam sido obtidos com a combinação par de primers ITS5/NL4 (PCR), e digestão com a enzima Ddel (RFLP), estes padrões foram utilizados para analisar os resultados deste estudo. Das 30 amostras submetidas ao diagnóstico convencional 6 (20%) amostras foram positivas, enquanto a amplificação por PCR detectaram DNA fúngico em 11 (36,6%) amostras.  Na análise molecular os produtos amplificados apresentaram aproximadamente 1.100pb. Após a digestão as amostras obtiveram os seguintes padrões: Candida albicans 6 (54,5%): 550, 350 e 275pb; Candida tropicalis 1 (9,1%): 425, 350, 275 e 200pb; Candida parapsilosis 1 (9,1%): 550, 350 e 275pb; Cryptococcus neoformans 1 (9,1%): 550, 400 e 100pb; Cryptococcus gattii 1 (9,1%): 475, 425, 300 e 400pb. Uma (9,1%) amostra com o perfil 350, 200 e 150pb não apresentou similaridade aos padrões de fungemias utilizados. Houve concordância no diagnóstico em 21 (70%), e discordância em 9 (30%) amostras. Os resultados deste estudo demonstraram que a técnica de PCR/RFLP apresentou maior poder de detecção de agentes fúngicos, quando comparada à metodologia convencional