Resumo

As doenças diarréicas são uma das principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Atualmente os enteropatógenos mais freqüentemente isolados em material fecal são: Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter jejuni, Vibrio spp., Yersinia enterocolitica, Aeromonas spp., Plesiomonas shigelloides e as estirpes diarreiogênicas de Escherichia coli (DEC): EPEC, ETEC, STEC, EIEC, EAEC e DAEC. A maioria dessas bactérias é detectada pela coprocultura, mas o diagnóstico das DEC requer a utilização de métodos moleculares, imunológicos e/ou cultivo celular, uma vez que elas não podem ser diferenciadas das E. coli da microbiota intestinal através de métodos convencionais. Este trabalho teve como objetivo determinar a freqüência de bactérias causadoras de diarréia em 125 coproculturas realizadas no LACEN-PR, no período de janeiro a junho de 2010. As amostras foram analisadas através de protocolos do serviço de bacteriologia do LACEN e apresentaram o seguinte resultado: Salmonella spp (8,7%), Shigella sonneii (3,5%), Aeromonas caviae (0,9%), Campylobacter jejuni (0,9%) e EPEC do grupo B (0,9%). Para a análise por PCR-Multiplex para a presença de DEC foram selecionadas 31 amostras. Estas foram cultivadas em ágar MacConkey e a região de crescimento primário foi usada para a extração de DNA pela técnica da fervura. As reações de PCR foram realizadas em volume final de 25 µL contendo 20ng de DNA, tampão da Taq 1X, MgCl₂ 1,5mM, dNTP 0,2 mM, mistura de iniciadores, Taq Platinum 1 U. O programa utilizado foi: 1 ciclo de 94^oC por 4’ seguido de 30 ciclos de 94^oC por 1’, 60^oC por 1’, 72^oC por 1’ e um ciclo de 72^oC por 10’. A detecção dos produtos de PCR foi realizada por eletroforese em gel de agarose a 2,5 % em TBE 1X, as corridas eletroforéticas foram realizadas a 35V por 3 horas. Os géis foram corados com brometo de etídeo e visualizados em transiluminador UV. Na triagem por PCR-Multiplex foram identificadas 2 EPEC atípicas (6,4%) e 2 STEC (6,4%). As colônias identificadas como EPEC B na coprocultura deram resultado negativo na PCR-Multiplex, sugerindo que a sorotipagem pode levar a resultados falsos-positivos. Esses resultados também indicam que a freqüência das infecções causadas pelas DEC são subestimadas. Apoio: Fundação Araucária.