Resumo

A identificação de patógenos humanos é de fundamental importância para a saúde pública. No laboratório Clínico características fenotípicas como reação ao Gram, crescimento em diferentes meios e/ou atmosferas, bem como ensaios para avaliar o perfil metabólico das bactérias são utilizados para a identificação.Estes testes dependem do crescimento bacteriano e são necessários vários dias para a identificação. Nos últimos anos novas metodologias com potencial para reduzir significativamente o tempo e aumentar a confiabilidade da identificação bacteriana se tornaram disponíveis.Entre estes métodos encontra-se a espectrometria de massa do tipo Matriz-Assisted Laser Desorption Ionization - Time of Flight (MALDI-TOF MS) que permite a identificação de microorganismos em poucos minutos. O objetivo deste trabalho foi analisar as bactérias Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermites, Escherichia coli, Escherichia hermannii, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Salmonella Typhimurium, Shigella flexneri, Klebsiella pneumoniae e Klebsiella oxytoca utiizando MALDI-TOF MS. Colônias isoladas foram transferidas para tubos de plástico e as células foram lavadas com água, etanol 75%, e então lisadas com ácido fórmico 70% e acetonitila (1:1). As suspensões foram centrifugadas a 25.000 x g por 2 minutos e 1 uL dos sobrenadantes foi depositado sobre a placa de MALDI e seco ao ar. Então 1 uL da matriz ácido a-ciano-4-hidroxicinâmico (10mg/ml) dissolvida em acetonitrila : ácido trifluoroacético 2,5% (1:1) foi adicionado às amostras e seco ao ar. As amostras foram analisadas em espectromêtro de massa Autoflex MALDI-TOF (Bruker) com um laser de nitrogênio (337nm), operando de modo linear positivo, na faixa entre 3.000 a 20.000 m/z, com uma média de mil tiros de laser (100 disparos de laser em 10 posições diferentes). O programa Autoxecute FlexControl foi utilizado para a aquisição automática de espectros de massa. Espectros característicos para cada bactéria foram obtidos indicando que a metodologia de MALDI-TOF MS apresenta potencial para a identificação bacteriana em laboratórios clínicos. O tempo total de análise, incluindo preparo da amostra , foi de 15 minutos, bem abaixo do tempo necessário para a identificação de bactérias por métodos tradicionais.A redução do tempo de análise em isolados clínicos é de extrema importância uma vez que agiliza o diagnóstico e tratamento do paciente. Apoio: Fundação Araucária.