EFEITO DA INATIVAÇÃO DOS SISTEMAS REGULADORES VICKR E COVR NA SUSCEPTIBILIDADE DE STREPTOCOCCUS MUTANS À FAGOCITOSE POR NEUTRÓFILOS HUMANOS

Natália Leal Vizoto (FOP-UNICAMP); Cristiane Duque (FOP-UNICAMP); Rafael Nóbrega Stipp (FOP-UNICAMP); Flávia Sammartino Mariano (FOP-UNICAMP); José Francisco Höfling (FOP-UNICAMP); Renata de Oliveira Matos Graner (FOP-UNICAMP)

Os sistemas de dois componentes (SDC) são fundamentais para a resposta bacteriana a estímulos ambientais e modulam a expressão de genes de virulência em resposta a fatores externos e do hospedeiro. Dois SDC conservados em diversas espécies patogênicas de Streptococcus, VicKR e CovRS, parecem regular diversos genes de virulência, inclusive genes com função anti-fagocítica. Estes dois sistemas foram identificados em Streptococcus mutans, principal patógeno da cárie dentária, também implicado na endocardite bacteriana. O objetivo deste estudo foi identificar o efeito da inativação de VicKR e CovR na susceptibilidade de S. mutans à fagocitose por neutrófilos humanos (PMN). Para isto, mutantes knock-out dos genes vicK e covR foram construídos a partir da cepa S. mutans UA159 (UAvicK^- e UAcovR^-), através de mutagênese com alelo contendo cassete de resistência à eritromicina. As cepas mutantes e selvagem foram então cultivadas em meio BHI (18h, 37^oC, 10% CO₂) com ou sem eritromicina (10ug/ml); as células foram lavadas em PBS e re-suspendidas em RPMI (com 10% soro bovino), para a concentração de 1x10⁸ ufc/ml. O total de 500ul destas suspensões foram adicionadas a 500ul de sangue periférico coletado de voluntário saudável. Após homogeneização, os tubos foram incubados a 37^oC e 5% de CO₂ durante 5, 15, 30, 60 e 120 min. A seguir, esfregaços de 20 ul das amostras foram corados com Giemsa e May-Grunwald e analisados em microscópio de luz. A contagem do número de PMN com bactérias internalizadas foi realizada em aumento de 100x. Reduções intensas na capacidade de fagocitose dos mutantes UAvicK^- e UAcovR^- por PMN foram observadas em comparação com a cepa selvagem; reduções da porcentagem de PMN com bactérias internalizadas foram de cerca de 80 a 60% nos primeiros 15 min. de exposição bacteriana e se mantiveram significativamente menores nos mutantes até 1h de exposição (Mann-Whitney, p<0.01). Estes dados indicam que a inativação de vicK e covR influencia na susceptibilidade de S. mutans à fagocitose por PMN, sugerindo que VicKR e CovR controlem fatores diretos ou indiretos de escape à fagocitose por PMN, podendo influenciar na capacidade desta espécie em causar bacteremia e endocardite. A identificação destes fatores é alvo de estudos futuros. FAPESP (proc. 07/57454-2.)