EXPRESSÃO DE MRNA PARA TLR 2, TLR 4, TLR5, MD-2 E IL-8 EM CÉLULAS HELA INFECTADAS POR TRITRICHOMONAS FOETUS

Telma Maria Alves (UFMG); Monalisa Sousa Moura Souto (UFMG); Juliana Pinto da Silva Mol (UFMG); Ana Paula Reinato Stynen (UFMG); Fábia Souza Campos (UFMG); Carlos Manuel Campero (INTA); Rebeca Barbosa Pauletti (UFMG); Andrey Pereira Lage (UFMG)

Tricomonose bovina é uma doença sexualmente transmissível de importante causa de perdas econômicas em rebanhos de corte e de leite. Em vacas, causa principalmente repetição de cio com intervalos irregulares e aumentados, vaginite, cervicite, endometrite, piometra, morte embrionária, feto macerado e aborto e no macho é assintomática. A interação do protozoário com a camada epitelial vaginal é crucial para o estabelecimento da tricomonose, desencadeando a resposta imune inata, reconhecendo moldes moleculares associados à patógenos (PAMPs) que são expressos nos agentes infecciosos. Um dos mecanismos de reconhecimento dos PAMPs são receptores semelhantes ao Toll (Toll-like receptors-TLRs). Ao interagirem com os PAMPs, os TLRs iniciam a cascata de sinalização que ativa o fator nuclear kappaB levando a produção de citocinas pró-inflamatórias.  O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de mRNA para TLR2, TLR4, TLR5, MD-2 e IL-8 em células HeLa infectadas por Tritrichomonas foetus isolado de fêmea bovina. Foi utilizada a linhagem de células HeLa, na concentração de 1,2x10⁶ cel/mL em placas de 6 poços, inoculadas com suspensões de T. foetus na multiplicidade de infecção de 3 protozoários/cel e incubados por 2, 6, 12, 18 e 24 h. Após cada tempo foi realizada a extração de mRNA pelo método do Trizol, com posterior confecção do cDNA pelo kit TaqMan. A determinação de acúmulo de mRNA para TLR2, TLR4, TLR5, MD-2 e IL-8 foi realizada por qRT–PCR em tempo real. Os resultados foram analisados utilizando o método comparativo de Cts. Os resultados obtidos foram comparados por análise de variância, quantitativamente após normalização baseada na expressão de GAPDH.  O acúmulo de mRNA para IL-8 iniciou-se a partir de 12h de incubação, tendo um aumento significante às 18h e, diminuindo às 24h. A expressão de mRNA para TLR5 apresentou uma baixa expressão às 6h após a infecção, caindo às 12h e aumentando às 18h e tendo uma diminuição às 24h. A expressão de mRNA para TLR4 iniciou-se em 12h e, em conjunto com TLR5, coincide com a maior expressão de mRNA para IL-8. A expressão de mRNA para TLR4 iniciou a expressão às 12h, com um pico às 18h, diminuindo às 24h. Estes resultados indicam que a expressão de mRNA para IL-8 em células epiteliais após a infecção por T. foetus é dependente da expressão de mRNA para TLR4 e TLR5. Agradecimentos: Fapemig, Capes, CNPq, FEP MVZ.