| Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N )
CARACTERIZAÇÃO DE FOSFOLIPASES DE PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS NA INTERAÇÃO COM MACRÓFAGOS ALVEOLARES
Deyze Alencar Soares (UFG); Rosângela Vieira Andrade (UCB); Maria Sueli Soares Felipe (UNB); Silvana Petrofeza da Silva (UFG)
ResumoParacoccidioides brasiliensis possui vários fatores de virulência que
participam do processo de invasão do hospedeiro pelo fungo.Neste
contexto, o objetivo deste trabalho foi verificar a expressão dos genes
correspondentes às fosfolipases de P.brasiliensis
na interação com macrófagos alveolares.Para isto, foram selecionadas
sequências gênicas de fosfolipases B(PLB),C(PLC) e D(PLD) no
transcriptomas de P.brasiliensis
(Pb01).Estas foram traduzidas para sequências de aminoácidos
correspondentes através do programa TRANSLATE e comparadas com
sequências de proteínas correspondentes a fatores de virulência de
fungos patogênicos humanos disponíveis em banco de dados
(Genebank,EMBL) utilizando como ferramentas o programa BLASTP.A
sequência PBDEX-Y1-034t-A03 apresentou maior homologia com a PLB do
fungo Ajellomyces capsulatus.Dos
639 aminoácidos analisados,76% apresentaram-se idênticos e 88%
conservados.A comparação entre essa sequência parcial da PLB de P.brasiliensis e a de Coccidioides immitis demonstrou elevado grau de conservação na sequência (79% similaridade,67% identidade) o mesmo foi observado para PLB de Candida albicans (61% similaridade,42% identidade).Já a sequência PBDEX-Y1-043t-B05 apresentou maior homologia com a PLC do fungo A.capsulatus.Dos aminoácidos analisados (68% identidade,79% similaridade).A comparação entre essa sequência parcial de PLC de P.brasiliensis e de C.immitis demonstrou elevado grau de conservação na sequência (77% similaridade,65% identidade) o mesmo foi observado para PLC de C.albicans (53% similaridade,35% identidade).A outra sequência obtida PBDEX-Y1-047t-B05 apresentou maior homologia com a PLD do fungo A. capsulatus.Dos aminoácidos analisados ( 71% identidade,77% similaridade).A comparação entre essa sequência e a de C.immitis demonstrou elevado grau de conservação na sequência (76% similaridade,67% identidade) o mesmo foi observado para PLD de Cryptococcus neoformans (54%
similaridade,38% identidade).A análise dos níveis de transcritos dos
genes que codificam para fosfolipases foi realizada usando RT-PCR em
tempo real pelo método de comparação do CT ( Crossing Threshold),
utilizando o gene constitutivo que codifica para alfa tubulina de P.brasiliensis para normalização.Foi observado que a plb1 apresentou maior acúmulo de 0,18 vezes em relação à outros genes de fosfolipases.Enquanto que a plc e pld apresentaram
0,06 e 0,11 vezes,respectivamente.A caracterização das fosfolipases
pode ajudar no entendimento do mecanismo da ação dessas enzimas na
interação fungo/hospedeiro.
Palavras-chave: Fosfolipases, Macrófagos alveolares, Paracoccidioides brasiliensis |