Resumo

Introdu��o: A febre maculosa � uma doen�a infecciosa e apresenta um amplo espectro cl�nico. Causada pela bact�ria Rickettsia rickettsii e transmitida pelo carrapato, possui prote�nas autotransportadoras (AT) expostas na superf�cie celular denominadas de prote�na de membrana externa (Omp). Dentre essas, a OmpA � um ant�geno imunodominante e exclusiva do grupo da febre maculosa (GFM). O nosso estudo visa identificar ep�topos da Omp de R. rickettsii, cepa Brazil, que contribuir� em um diagn�stico pept�dico mais espec�fico e sens�vel para o GFM, pois o diagn�stico padr�o apresenta rea��o cruzada com rickettsias de outros grupos. Materiais e M�todos: A antigenicidade do conjunto de Omp da R. rickettsii foram analisadas pelo servidor Vaxijen v 2.0 usando par�metro padr�o (Limiar= 0.4, ACC out put). A rea��o cruzada com outras prote�nas de outros microorganismos foi avaliada pelo Blastp e o Clustal W foi realizado com outras OmpAs do GFM. A sele��o das regi�es expostas na superf�cie da Omp foi realizada usando o servidor de dom�nio transmembrana, TMMOD, e o �ndice de hidrofilicidade pelo m�todo de WOOP & HOOD. Do segmento selecionado obteve-se uma biblioteca de pept�deos com o software Multipep, contendo 14 res�duos de extens�o, e sobreposi��o de 9 res�duos. A partir da biblioteca com a t�cnica F-moc foram obtidos pept�deos sint�ticos e ligados covalentemente a uma membrana celul�sica atrav�s do �Cellu Spot�. A identifica��o dos spots positivos foi realizada com soros de pacientes (n=20) com GFM e anti-IgM/IgG conjugado com fosfatase alcalina. A Omp foi reanalisada pelo servidor Bepipred para confirmar a sua especificidade. Discuss�o dos resultados: A an�lise pelo Vaxijen resultou na H6PGA4 com um score de 0.6784. O blast n�o apresenta rea��o cruzada e Clustal W uma identidade de ≅ 96% com a OmpA do GFM. A predi��o de ep�topos B lineares foram 50. A regi�o hidrof�lica e exposta selecionada para an�lise imunol�gica mostrou ser acess�vel ao sistema imune. A reatividade da biblioteca de 84 pept�deos sint�ticos com anticorpos IgM e IgG est�o sendo revalidada. Resultados experimentais preliminares identificaram um total de 42 epitopos B lineares. Embora o n�mero total do predito seja pr�ximo ao te�rico, as sequ�ncias dos ep�topos s�o discordantes. Conclus�o pr�via: A prote�na H6PGA4 da rickettsia � uma prov�vel OmpA, pertencente a fam�lia AT e exclusiva do GFM. Possui cerca de 40 epitopos B lineares dos quais 8 foram selecionados para serem empregados em futuros testes diagn�sticos espec�ficos. Institui��o fomento: FIOCRUZ