Resumo

A cadeia alimentar tem sido descrita como rota e difus�o de micro-organismos resistentes a antibi�tico. Dentre os micro-organismos destaca-se as esp�cies de Enterococcus, por apresentarem resist�ncia intr�nseca, mediada por genes localizados em cromossomos ou adquirida, mediada por genes presentes em plasm�deos e transposons. Neste estudo avaliamos a transfer�ncia do gene vanA entre isolados de E. faecium e E. faecalis, via processo conjugativo in vitro em leite reconstitu�do. Para tanto, foi tra�ado o perfil genot�pico e fenot�pico dos isolados doadores E. faecalis 802 e E. faecium 924 e receptores E. faecalis 848, 872 e 906. Como marcadores moleculares obtivemos os isolados doadores vanA+ tetL- gelE- cpd- e receptores vanA- tetL+ gelE+ cpd+. Todos os genes foram confirmados quanto a localiza��o plasm�dial ou cromossomal. O gene cpd codifica uma prote�na denominada ferom�nio sexual expressa pelo receptor. A Concentra��o Inibit�ria M�nima para os antimicrobianos vancomicina e tetraciclina foi estabelecida segundo a metodologia de preconizada pelo CLSI. O processo de conjuga��o foi realizado em leite em p� reconstitu�do na raz�o de 1:1(doador: receptor), sob agita��o de 80 rpm a 37�C por 6 horas. A cada 2 horas, uma al�quota do co-cultivo foi retirado e semeado em meio MHA suplementado com tetraciclina (16μg/mL) e vancomicina (32μg/mL). Foi observado crescimento de col�nias transconjugantes com todos os pares conjugativos e todos os tempos de co-cultivo, mesmo sendo o doador e receptor da mesma esp�cie e esp�cies diferentes. Os transconjugantes foram confirmados pela t�cnica de PCR para a presen�a dos genes eleitos como marcadores moleculares. Tamb�m foi realizado o processo de conjuga��o com doador morto, excluindo a possibilidade de transforma��o. A estabilidade plasmidial dos transconjugantes foi realizada por repiques celulares consecutivos em meio sem press�o seletiva finalizando com meio contendo os antibi�ticos tetraciclina e vancomicina. Cem por cento das col�nias transconjugantes mantiveram o plasm�deo. Este trabalho mostrou a dissemina��o de genes de resist�ncia entre isolados de Enterococcus sp, quando presente em alimento, o que pode acarretar em um aumento da frequ�ncia de Enterococcus spp. resistentes � vancomicina e outros antimicrobianos, dificultando ainda mais sua terap�utica. Apoio: Funda��o Arauc�ria e CNPq.