Resumo

Na ultima década houve uma mudança na etiologia das bacteremias, sendo que os Estafilococos coagulase negativa (ECN) se tornaram os primeiros agentes isolados. Um fator relevante envolvido na patogênese é a alta taxa de isolamento de Staphylococcus spp. resistente a oxacilina. A aplicação de técnicas de biologia molecular, entre elas PCR multiplex se mostrou uma técnica promissora devido a sua rapidez, acurácia e sensibilidade na obtenção dos resultados. Esse estudo objetivou a padronização de um multiplex PCR para a detecção de Staphylococcus spp. e resistência à oxacilina diretamente dos frascos de hemocultivo. Foram analisadas 371 amostras de hemoculturas obtidas de pacientes do HC da Faculdade de Medicina de Botucatu. Os microrganismos foram identificados por testes bioquímicos e simultaneamente o DNA bacteriano foi extraído diretamente dos frascos de hemoculturas para a amplificação por PCR multiplex do gênero Staphylococcus spp. e do gene mecA. Das 371 amostras estudadas foram isolados 85 (23,0%) S. aureus e 286 (77,0%) ECN. Dos ECNs 155 (54,2%) foram identificados como S. epidermidis, 50 (17,5%) S. warneri, 27 (9,4%) S. capitis, 26 (9,1%) S. haemolyticus, 7 S. xylosus, 6 S. simulans, 2 S. hominis, 2 S. caprae, 2 S. cohnii, 2 S. lugdunensis, 2 S. saprophyticus, 1 S. schleiferi, e concomitantemente 3 S. haemolyticus e S. warneri, e 1 S. hamemolyticus e S. epidermidis. Das 85 amostras de S. aureus 43 (50,6%) se mostraram resistentes no teste de disco difusão e 42 (97,7%) apresentaram o gene mecA e das 286 amostras de ECN 236 (82,5%) foram detectadas resistentes por esse método e 218 (92,4%) foram positivas para o gene mecA. A identificação fenotípica e a genotípica (PCR multiplex) mostrou 100% de concordância nas amostras onde foram isolados S. aureus e ECN. A única discordância foi quanto à detecção de resistência à oxacilina, sendo que em 19 amostras não foi detectado o gene mecA e estas amostras se mostraram resistentes no teste de suscetibilidade à oxacilina, podendo estar relacionado com outras formas de resistência desenvolvida pela espécie, como a hiperprodução de beta-lactamase ou modificação de outra PBP. O PCR multiplex se mostrou sensível, específico, rápido e com uma boa concordância com os resultados fenotípicos, podendo ser utilizado para a rápida detecção e tratamento adequado das bacteremias causadas por esses microrganismos.